摘要:在進行梯度洗脫時更高效,由于多種溶劑混合長足發展,而且組成不斷變化的特性,因此必然帶來一些特殊的問題組合運用,我們必須充分地重視顯著。
1凝聚力量、要注意溶劑的互溶性開展試點,不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相意見征詢。有些溶劑在一定的比例內互溶組成部分,超出一定的范圍后就不會互溶。例如:乙腈和1mol/L的醋酸銨(pH5.16)做梯度洗脫集聚,乙腈含量超過70%時就會出現(xiàn)不溶高效化,甲醇和已烷混合,甲醇含量高于30%時就會分層等新的動力。當有機溶劑和緩沖溶液混合時還可能析出鹽的結晶體完成的事情,尤其使用磷酸鹽時需特別小心。
2為產業發展、梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高研究成果,以保證好的重現(xiàn)性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫穩定,以辯認溶劑雜質峰兩個角度入手,因為弱溶劑中的雜質富集在色譜柱頭上后會被強的溶劑洗脫出來。用于梯度洗脫的溶劑需*脫氣廣泛認同,以防止溶劑混合時產生氣泡進入當下。
3、混合溶劑的粘度常隨組成而變化服務好,因此在梯度洗脫時常會出現(xiàn)壓力變化首次,例如純水或甲醇的粘度都比較小流動性,但是當二者以相近的比例混合時粘度會增大很多,此時的柱壓是純水或甲醇為流動相時的兩倍生產效率。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱所能承受的大壓力反應能力。
4、每次梯度洗脫之后必須對色譜柱進行再生處理競爭激烈,使其恢復到初始的狀態(tài)投入力度。需讓10~30倍柱容積的初始流動相流經色譜柱,使固定相與初始流動相達到*平衡越來越重要。